需要自备的器材：  
1．PCR检测试剂盒仪器：分析天平、离心机、荧光PCR扩增仪、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2μL、20  
μL、200μL、1000μL）。  
2．耗材：荧光PCR反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5mL经焦碳二谣（DEPC）水  
处理的灭菌离心管、吸头（10μL、200μL、1000μL）、灭菌双蒸水。  
相对定量分析方法：  
2-ΔΔCt  
前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内  
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：  
ΔCT（test）=CT（target,test）-CT（ref,test）  
ΔCT（calibrator）=CT（target,calibrator）-CT（ref,calibrator）  
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：  
ΔΔCT=ΔCT（test）-ΔCT（calibrator）  
3、计算表达水平比率：  
2–ΔΔCT=表达量的比值  
使用方法:  
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）  
1.注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供样品做阳性对照，只提供可以钟使用的DNA段作为阳性对照。  
2.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。  
3.用带芯头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液（用带芯头，下同）。  
4.在7号管中加入5μL1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。  
5.换头，在6号管中加入5μL1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。  
6.换头，在5号管中加入5μL1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。  
7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。  
具有下列特点：  
1.根据指标的保守序列设计的专一性引物，余关无交叉反应。  
2.灵敏度比常规PCR高2-3个数量级，可以达到几百拷贝/反应。  
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。  
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。  
5.本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。  
6.本产品只适用于科研，不能用于临诊断。  
注意事项：  
1.建议使用新鲜采取的动物组织，若为长期冷冻组织，应尽量避免反复冻融，否则会导致模板的降解，影响PCR效率。  
2.试剂BufferAL若低温保存，易产生沉淀。在使用前务必将其在室温中放置一段时间，也可在37℃水浴中预热10min，以溶解沉淀，混匀后再使用。  
3.电泳检测时，切勿使用含有SDS的LoadingBuffer。否则，电泳时会在泳道中出现一大团拖尾亮带，影响实验结果。  
4.建议扩增片段长度1kb以内，以便扩增效率佳。  
5.为了您的**和健康，请穿实验服并佩戴一次性手套操作。  
更多访问：  
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