染料法荧光定量PCR试剂盒前提：目标序列和内参序列的扩增效率接近100％且偏差在5％以内
1、用内参基因的CT值归一目标基因的CT值：
ΔCT（test）=CT（target,test）-CT（ref,test）
ΔCT（calibrator）=CT（target,calibrator）-CT（ref,calibrator）
2、用校准样本的ΔCT值归一试验样本的ΔCT值：
ΔΔCT=ΔCT（test）-ΔCT（calibrator）
3、计算表达水平比率：
2–ΔΔCT=表达量的比值
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照（以10E2-10E7拷贝/μL这6个10倍稀释度为例）
1.注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分）。为增加产品稳定性和避免扩散传染原，本产品不提供样品做阳性对照，只提供可以钟使用的DNA段作为阳性对照。
2.标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
3.用带芯头分别加入45μL荧光PCR模板稀释液（用带芯头，下同）。
4.在7号管中加入5μL 1×10E8拷贝/μL的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5.换头，在6号管中加入5μL 1×10E7拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6.换头，在5号管中加入5μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7.重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
具有下列特点：
1.根据指标的保守序列设计的专一性引物，余关无交叉反应。
2.灵敏度比常规PCR高2-3个数量级，可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用，用户只需要提供样品模板，操作简单，定量准确快速。
4.一管式荧光定量PCR检测，避免后续污染。
5.本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
6.本产品只适用于科研，不能用于临诊断。
需要自备的器材：
1．仪器：分析天平、离心机、荧光PCR扩增仪、组织研磨器、-20℃冰箱、可调移液器（2μL、20
μL、200μL、1000μL）。
2．耗材：荧光PCR反应管、眼科剪、眼科镊、生理盐水、1.5 mL经焦碳二谣（DEPC）水
处理的灭菌离心管、吸头（10μL、200μL、1000μL）、灭菌双蒸水。
更多访问：
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