上海远慕生化试剂厂家详细讲述HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,pH7.05)的操作方法，注意事项及其他咨讯说明等，作为专业的生化试剂供应商，我司所供应的缓冲液品种齐全，价格实惠，品种包含：磷酸盐缓冲液，原生质体缓冲液，包涵体裂解缓冲液，植物电穿孔缓冲液，DNA中和缓冲液Ⅱ，脱氧核糖核酸缓冲液，更多缓冲液请来电咨询！

HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,pH7.05) 说明书

【操作方法】

1、 在转染前24h用蛋白酶消化培养细胞，取适量数期细胞转移至新的培养器皿中，使细胞在转染时生长状态良好。

2、 在加入DNA之前2～4h,按9ml/10cm培养皿的比例加入完全培养液,置于37℃5% CO2培养箱培养。

3、 取适量乙醇沉淀的DNA溶解于无菌水中，加入50μl 2.5M CaCl2，并充分混匀，使Ca2+终浓度达到0.25M。

4、 用移液器一边吹打2×HeBS,一边逐滴加入配制好的CaCl2溶液(操作应迅速，一般在30～60s)，并剧烈振荡5s，室温下静置以形成沉淀。

5、 取沉淀均匀加入到培养皿细胞中，轻轻晃动使沉淀于培养液充分混匀，置于37℃ 5%CO2培养箱培养。

6、 去除培养液，用PBS清洗细胞2次，加入5完全培养液继续培养。

7、 对于瞬时转染，在转染的不同时间点内收集细胞并检测，一般时间多控制在12～60h以内。

8、 对于稳定转染，转染后在非选择性培养液培养，一般时间多控制在24～36h，以便外源基因表达。

9、 用胰蛋白酶消化细胞并传代，更换适当的选择培养液继续培养，没2～4d更换一次选择培养液，一般10～14d会出现目的细胞克隆。

【注意事项】

1、注意无菌操作,尽量避免污染。

2、对于瞬时转染,可以不用乙醇沉淀的DNA。

3、休克处理某些细胞系会使转染效率大大提高,但应注意甘油暴露过久易导致细胞死亡。

4、转染12～24h后,可以加入终浓度为10mmol/L的丁酸钠溶液,可以提高病毒滴度。

5、该试剂用于转染时应检测其转染效率,好的转染效率应介于30～60%之间。

6、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

【简介说明】

HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS,pH7.05)外源基因导入真核细胞的方法有很多种，如磷酸钙转染法、DEAE-葡聚糖转染法、脂质体法、电穿孔法、显微注射法等。HEPES缓冲盐溶液(2×HeBS)是一种常用的细胞转染溶液，主要由HEPES、氯化钠、磷酸盐等组成，其最适pH值为7.05～7.12，经过滤除菌处理。

影响磷酸钙转染效率的因素主要有沉淀中DNA含量、DNA在细胞上停留的时间、休克时间。Leagene 2×HeBS要求DNA浓度在10～50μg为宜，Hela、BALB等细胞沉淀放置16h。

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