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黄石市蓝图生物科技有限公司

人伤寒(Typhoid)定性检测试剂盒(ELISA) 说明书

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    • 【产品名称】 通用名称:人伤寒(Typhoid)定性检测试剂盒(ELISA) 英文名称:Human Typhoid (Typhoid) ELISA KIT 【包装规格】 48人份/盒,96人份/盒 【预期用途】 仅供科研使用,定性检测血清、血浆、细胞培养上清液中是否含有人伤寒。 【检验原理】 本试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验(ELISA)。在预包被人伤寒抗原(固相抗原,货号:LT1050001C)的微孔酶标板中,加入人伤寒阴阳性性对照(货号:LT1050001J)和待测样本,温育洗涤,再加入另一株HRP标记的抗人伤寒抗体(酶标抗体,货号:LT1050001E),经过温育与充分洗涤,去除未结合的组分,在微孔板固相表面形成固相抗原-抗体-酶标抗体的夹心复合物。加底物A和B,底物在HRP催化下,产生蓝色产物,在终止液(2M 硫酸)作用下,最终转化为黄色,在酶标仪上测定吸光度(OD值),吸光度(OD值)与待测样品中人伤寒的浓度正相关,通过计算公式判断样品阴阳性。 【主要组成成分】 主要成分 组分 数量 主要成分 阴性对照 0.5ml/管 不含待测物的缓冲液 阳性对照 0.5ml/管 含待测物的缓冲液 包被微孔板 96T 预包被固相抗原 HRP标记抗体 6mL HRP标记的检测抗体 底物液A 6mL 过氧化脲工作液 底物液B 6mL TMB工作液 样本稀释液 6mL 缓冲液 终止液 6mL 硫酸稀释液 20×浓缩洗涤液 30mL 含0.15%Tween20的PBS 说明书 1份 -- 自封袋 1个 -- 不干胶 2片 -- 阴阳性对照已经通过测试,结果表明HBs抗原阴性,HIV1、HIV2和HCV抗体阴性,由于不存在一种试验方法能够完全保证没有这些物质,本品必须按照具有潜在的感染性进行处理,处理过程应当遵循通用的安全措施。 需要但未提供的材料及耗材 1、酶标仪 2、精密移液器及一次性吸头 3、蒸馏水 4、洗瓶或者自动洗板机 5、37℃水浴锅或恒温箱 6、500ml量筒 7、无粉一次性乳胶手套 8、质控品(可以从蓝图生物选择,货号:LT1050001Q) 【储存条件及有效期】 1、2-8℃保存,切勿冷冻,有效期6个月。 2、开封使用后,包被微孔板放入带有干燥剂的自封袋中,密闭自封袋,并将全部试剂放回2-8℃冰箱。 3、开封后,按照建议的条件保存,校准品、包被微孔板和HRP标记抗体,有效期为28天,其他成分在标签标明的有效期内是稳定的。 【适用仪器】 半自动的酶标仪,如Thermo MK3,或者国产酶标仪。 【样本要求】 样本类型和采集 以下只是列出样品采集的一般指南。所有样本采集过程中,不得使用叠氮钠做为防腐剂。 1、细胞培养上清:4000rpm条件下离心20min,去除细胞颗粒和聚合物,上清液保存在- 20℃以下,避免反复冻融。 2、血清:使用不含热原和内毒素的试管,操作过程中避免任何细胞刺激,4000rpm条件下离心20min,小心地分离出血清,保存在- 20℃以下,避免反复冻融。 3、血浆:肝素,EDTA,或柠檬酸钠作为抗凝剂。在4000rpm条件下,离心20分钟取上清,血浆保存在-20℃以下,避免反复冻融。 样本保存和稳定性 样本在2-8℃条件下,可以储存72h,或者在- 20℃储存6个月。样本收集后,不是一次检测完,请按一次用量分装冻存,避免反复冻融,使用时在室温下解冻,确保样品均匀充分解冻。 【检验方法】 试剂准备 1、使用前,所有的组分都要至少复温2h,确保充分复温到室温。 2、浓缩洗涤液:从冰箱取出的浓缩洗涤液,会有结晶产生,这属于正常现象,水浴加热使结晶完全溶解。浓缩洗涤液与蒸馏水,按1:20稀释,即1份的浓缩洗涤液,添加19份的蒸馏水。 3、底物:底物液A和B,在使用前,按1:1体积充分混合,混合后15分钟内使用。 操作程序 1、所有试剂和组分都先恢复到室温,标准品、质控品和样品,建议做复孔。 2、按前面试剂准备中描述的方法,配制好试剂盒各种组分的工作液。 3、从铝箔袋中取出所需板条,剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。 4、设置阴阳性对照孔、样本孔,阴阳性对照孔各加对照品50μL,样本孔加样本50μL。 5、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。 6、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。 7、所有孔加入辣根过氧化物酶标记的检测抗体100μL。 8、用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育30min。 8、揭开封板膜,弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置20s,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复4次(共洗板5次)。若使用自动洗板机,请按洗板机操作程序进行洗板,添加浸泡20s的程序,可以提高检测的精度。洗板结束,加底物前,要在干净不掉屑的纸上,充分拍干反应板。 9、将底物A和B按1:1体积充分混合,所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板,37℃水浴锅或恒温箱温育15min。 10、所有孔加入终止液50μL,在酶标仪上读取各孔吸光度(OD值)。 【检验结果的解释】 检测完成后,以阴性对照的OD+0.25,做为阈值,样本OD值大于阈值,为阳性;样本OD值低于阈值为阴性。 【检验方法的局限性】 1、仅供科研使用,不得用于临床诊断。 2、在试剂盒标示的有效期内使用,过期产品不得使用。 3、跟其他厂家的试剂盒或者组分不能混用。 4、使用试剂盒配套的样品稀释液。 5、如果样本值高于最高标准品浓度值,请将样本适当稀释后,再重新测定。 6、待测样本中存在的人抗鼠等异嗜抗体会干扰检测结果,检测前,请排除该因素。 7、通过其他方法得到的检测结果,与本试剂盒测定结果不具有直接的可比性。 【产品性能指标】 1、物理性能 试剂盒的各液体组分应澄清透明、无沉淀或者絮状物。微孔板铝箔袋应真空包装,无破损漏气。 2、阴性结果 阴性对照的OD值不高于0.2。 3、阳性结果 阳性对照的OD值不低于0.8。 4、特异性 本试剂盒识别天然和重组人伤寒,与结构类似物无交叉。 5、稳定性 2℃-8℃保存,有效期6个月。 【注意事项】 生物安全 1、检测必须符合实验室管理规范的规定,严格防止交叉污染,所有样品、洗弃液和各种废弃物都应按照传染物进行处置。 2、试剂盒的液体组分中,含有proclin-300防腐剂,可能引起皮肤过敏反应,避免吸入烟雾与皮肤接触。 3、底物液对皮肤、眼睛和上呼吸道有刺激作用,避免吸入烟雾。戴上防护手套,实验完成后彻底洗手。 技术提示 1、混合蛋白溶液时,避免起泡。 2、加校准品与样本时,每个校准品浓度和样本都要更换移液枪头,公共组分应该悬臂加样,避免交叉污染。 3、合适的温育时间,和充分的洗涤步骤,是保证实验结果准确性的必要条件。 4、底物溶液为无色液体,保存过程中变为蓝色,代表底物溶液已经失效,不得使用。 5、终止液加样顺序与底物溶液加样顺序一致,加入终止液后,蓝色底物产物,会瞬间变为黄色。 6、实验中,用剩的板条,应立即放回自封袋中,密封(低温干燥)保存。 7、所有液体组分,使用前充分摇匀,严格按照说明书标明的时间、加样量及加样顺序进行温育操作。 废物处理 所有使用或未使用的试剂,所有污染性的一次性材料,应当遵循传染性或潜在传染性产品的处理程序,每个实验室都有责任根据其实验的类型和危险性级别,进行废物和污物的处理,同时要严格依照有关规定对待所有的废物和污物。