方案优势

实现龟甲胶药材的 快速、准确、灵敏的定性分析。

采用标准

相关标准

方法/原理/步骤

　　分析条件

　　液相条件

　　色谱柱：Shim-pack XR-ODS III 2.0 mmI.D.×100 mm L., 2.2μm

　　流动相：A相-0.1%甲酸水溶液；B相-乙腈

　　流速：0.3 mL/min

　　柱温：35℃

　　进样量：5μL

　　洗脱方式：梯度洗脱，B相初始浓度为5%，洗脱程序见表1。

　　质谱条件

　　离子化模式：ESI,正离子模式

　　离子喷雾电压：+4.5 kV

　　雾化气流速：氮气3.0 L/min

　　干燥气流速：氮气15 L/min

　　碰撞气：氩气

　　DL温度：250℃

　　加热模块温度：400℃

　　扫描模式：多反应监测(MRM)

　　驻留时间：100 ms

　　延迟时间：3 ms

　　MRM参数：见表2

　　对照品和样品配制及前处理方法

　　取对照药材或待测样品粉末0.1 g，加入1%碳酸氢铵溶液50 mL，超声处理30 min，用微孔滤膜滤过。参照《中国药典(2015版)》龟甲胶项下，取滤液100μL，置于进样瓶中，加入胰蛋白酶溶液10μL(用1%碳酸氢铵溶液配制成浓度为1 mg/mL的胰酶溶液)，摇匀，37℃恒温酶解12小时，作为对照药材溶液或供试液。

　　结果与讨论

    龟甲胶对照药材的MRM色谱图

　　LCMS分析获得龟甲胶对照药材特征多肽的MRM色谱图，保留时间10.85 min，图1中两对特征离子对631.40>546.20以及631.40>921.40的信噪比分别为127479和7451，充分满足药典中要求的色谱峰信噪比大于3:1的要求。

　　实际样品分析

　　对两种市售龟甲胶药材样品进行分析，结果如图2、3和表3所示。

仪器设备

　　岛津超高效液相色谱仪LC-30A
一、 使用小粒径的填料
      通过这个方法将使快速分离成为可能。但是，由于色谱柱里流动阻力的增加，仪器各部件和色谱柱所承受的压力也将显著地增加。
二、 高温分离
      较高的温度可以加速物质的扩散，同时可以减小色谱柱里的流动阻力，也使得快速分离成为可能。高温分析在降低柱压方面很有效，但是高温引起色谱柱的劣化、导致样品分解等不足在应用时需要引起注意。