方案优势

有利于开展苏丹红的人体内暴露（血液中苏丹红）研 究，可以与外暴露（食品中苏丹红）建立联系，本研究 具有一定科研创新意义。

采用标准

相关标准

方法/原理/步骤

　　标准溶液的配制

　　(1)标准储备液：分别称取10.0mg的苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ标准品，溶于乙腈，定容至100.0mL，得到浓度为100.0mg/L的标准贮备液。

　　(2)标准系列：取标准储备液用乙腈稀释配制成0.40μg/L、2.0μg/L、10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L、250.0μg/L的标准系列溶液，进样前用0.25μm微孔滤膜过滤。

　　分离检测条件

　　标准曲线

　　系列工作溶液，以浓度为横坐标，定量离子对峰面积为纵坐标，建立标准曲线，每个浓度测定3次，取平均值。苏丹红工作溶液放置避光处。

　　精密度

　　选取添加标准品(苏丹红Ⅰ~Ⅳ)50.0μg/L，重复测定6次，精密度以相对标准偏差RSD表示。

　　回收率

　　在小鼠血液中添加10.0μg/L、50.0μg/L、100.0μg/L，高、中、低3个浓度的标准溶液，样品处理方法按“二、5”处理，计算回收率。

　　色谱分离条件的选择与优化

　　比较了ZORBAX SB-C8(4.6mm×50mm，3.5μm)和VARIAN Pursuit C18(150mm×4.6mm，5μm)两种色谱柱的分离情况。实验结果表明，选用150mm的VARIANPursuit C18柱，分离时间较长，苏丹红Ⅲ的出峰时间为35min，且未分离出苏丹红Ⅳ。而用ZORBAX SBC8柱，在8min内就能达到较好的分离效果。因此，本研究选择ZORBAX SB-C8色谱柱作为分离柱。

　　对于流动相的比例，参照相关文献的梯度洗脱程序进样检测的结果并不比单纯采用0.25%甲酸∶乙腈=20∶80等度洗脱的分离效果好，而且等梯度洗脱避免了梯度洗脱基线漂移以及耗时长的缺点。因此，本实验流动相中水相选择了0.25%的甲酸水溶液，有机相选择乙腈。水相与流动相比例为20∶80，色谱图如图1所示。

　　质谱条件的优化

　　本文选用电喷雾离子源正离子化方式对苏丹红Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ4种物质进行二级质谱分析，为了获得更高的离子强度，在MRM的模式下采用质谱方法自动优化软件对质谱条件进行优化，如表2所示。

　　标准曲线

　　将系列标准工作溶液按设置好的条件进行检测，采用外标法定量，以X轴表示样品浓度(μg/L)，Y轴表示定量离子对峰面积作标准曲线图，所得标准曲线的相关系数R2均大于0.99，如图2所示。

仪器设备

　　HITACHI CD6D台式高速冷冻离心机；

  基本操作程序：
  1 插上外接电源，把离心机前面的开关拨到ON的位置上，打开液  晶显示屏；
  2 设置运行条件。按任意指针键进入设置状态，用指针键选择设置项，用数字键输入设置条件，用ENTER键确认（移动光标即表示确认，但最后一项要用ENTER键确认）。一般来说只需设置速度、时间、温度；
  3 打开离心室盖门，小心装上转头；按“Rotor”键进行转头设置，按所使用的转头输入转头号码（每一个转头对应着一个转头号码，如R20A2——46，R21A——26），如是用R20A2，则输入46，如是用R21A，则输入26。按确认键Enter;
4 在天平或电子天平上成对平衡离心管，对称放置，旋紧转头盖子；
5 关好离心室盖门，按START键启动运行；
6 听到离心结束的提示音后，打开盖门，取出离心管；
7 取出并清洁转头、离心室。关上离心室盖门，置开关到OFF的位置，关上液晶显示屏；
8 填写使用登记表。