方案优势

简单、快速、准确。

采用标准

国家相关标准

方法/原理/步骤

　　标准溶液配制

　　精确称取100 mg枸橼酸西地那非标准品于100 mL容量瓶中，加入流动相50 mL使溶解，再用流动相定容至刻度，配制成1 mg/mL的储备液。取储备液适量，用流动相逐级稀释，配制成浓度分别为0.5、5.0、10.0、20.0、40.0、80.0µg/mL的标准溶液。

　　样品处理

　　固体样品：称取样品10 g，研磨均匀，然后精密称取2 g研磨均匀的样品，加入1%甲酸甲醇溶液10 mL，超声提取30 min后用1%甲酸甲醇溶液补足体积，过滤，取5 mL滤液作为待净化液。 液体样品：按样品体积比1%加入甲酸，过滤，精密取滤液5 mL作为待净化液。

　　Strata X-C小柱依次用3 mL甲醇和3 mL水活化平衡后，将待净化液分次过该小柱，再分别用3 mL水和3 mL甲醇清洗，抽至近干后，用5%氨水甲醇溶液洗脱3次，每次1 mL，收集洗脱液。整个过程流速小于1 mL/min。洗脱液用氮气吹干，1 mL流动相溶解，0.45µm滤膜滤过，续滤液作为供试品溶液。

　　固相萃取条件的选择

　　保健品中成分复杂，简单的液-液萃取并不能除去大部分杂质，会严重干扰西地那非的液相测定。Strata-X-C是混合型阳离子交换固相萃取小柱，对碱性化合物有很强的专属选择性，成功用于复杂样品中三聚氰胺等碱性化合物的纯化和浓缩。

　　西地那非为碱性化合物，本法利用其碱性性质，采用Strata-X-C对样品进行纯化和浓缩，分别使用水和甲醇清洗，除去大部分水溶性和脂溶性杂质，再用5%氨水甲醇溶液洗脱碱性的西地那非。

　　本固相萃取方法净化效果好，回收率稳定，平均为95.8%(20µg/mL，RSD=3.9%，n=6)。

　　色谱条件的选择

　　本法试验了不同比例的乙腈与0.1%甲酸水溶液以及乙腈与不同浓度醋酸铵水溶液作流动相的效果，发现乙腈与10 mM醋酸铵水溶液作流动相时，峰形对称、尖锐，检测灵敏度高。本法还采用实验室常用的紫外检测器检测，适用于一般实验室的常规检测分析。

　　本法使用了50 mm长的Kinetex C18色谱柱。Kinetex C18色谱柱是一种新型核-壳技术填料色谱柱,由于大大改善了填料的传质阻抗影响，可以在常规液相色谱仪器上实现超高压液相的性能，从而达到快速、高效的效果，大大提高工作效率，且不受仪器条件的影响，方便在各个实验室进行方法转移。在流速1.8 mL/min下，西地那非在约2.5 min处出峰，没干扰。

仪器设备

　　主要仪器

　　高效液相色谱仪(南京科捷)；超声波清洗器；氮吹仪；离心机。

　　试剂

　　枸橼酸西地那非标准品；固相萃取小柱Strata X-C 60 mg/3 mL；乙腈；甲酸、氨水、醋酸铵；文中所用水均为超纯水。

　　色谱条件

　　色谱柱：C18 2.6µm 50 mm x 4.6 mm；

　　流动相：乙腈-10 mM醋酸铵(V/V=35/65)；

　　流速：1.8 mL/min；

　　柱温：室温；

　　检测波长：290 nm；

　　进样量：10µL

结论

　　本法采用阳离子交换固相萃取小柱对样品进行净化后，进行高效液相色谱分析。固相萃取可除去样品中的大量杂质，再使用高效的液相色谱柱使枸橼酸西地那非能够快速出峰(仅约2.5 min)而不会受杂质峰干扰。

　　该方法操作简单，省时快速，精密度和准确度高，可用于片剂、胶囊剂、丸剂等固体保健品和口服液、酒类等液体保健品中枸橼酸西地那非的检测。