方案优势

至今为止，10-HDA 含量测定有薄层扫描法、分光光度法、气相法、液相法，且多见于分析蜂王浆中的10-HDA。薄层扫描法、分光光度法专属性和准确性较差，气相法处理繁琐，目前最为通用的是HPLC法。 液相法处理简单、结果准确。超声提取、冷藏沉淀后，用对羧基苯甲酸乙酯做内标，反相液相色谱法测定蜂王浆及其制品中10-HDA含量。

采用标准

国家相关标准

方法/原理/步骤

　　主要试剂

　　1、纯净水(二次蒸馏水)

　　2、甲醇：分析醇

　　3、乙醇：优级纯

　　4、内标物：对羟基苯甲酸甲酯含量99.0%

　　5、10-HAD标准品：99.0%以上。

　　色谱条件

　　色谱柱为Kromasil C18柱，流动相为V(甲醇):V(水):V(磷酸)=55:45:0.2，流速1.0ml/min，对羧基苯甲酸乙酯作内标，检测波长210nm。本法简单、快速、准确，重现性好，回收率高(97.6%～101.8%)。

　　使用前应在放有浓硫酸的减压干燥器内减压干燥24h 6.10-HAD标准溶液：取干燥后的10-HAD标准品约25mg，精密称定，加无水乙醇溶解并移入1000ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。此溶液每毫升含内标物约0.65mg。7.盐酸(C=0.03mol/L)：量取0.1mol/L盐酸100ml，加入200ml重蒸馏水中。

　　样品处理

　　样品解冻至室温后用玻璃棒搅匀，取约0.5g，置于已称定的50ml容量瓶中，精密称定，加0.03mol/L盐酸1ml和水2ml，置漩涡混合器上混合使样品溶解，加无水乙醇30ml，边加边轻轻摇动，再精密加入内标溶液10ml，并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，立即置超声波中超声15min，或置漩涡混合器上振荡15min，取出，在3000r/min下离心10min后测定。如不能及时测定，应放置在冰箱中冷藏待测。

仪器设备

　　仪器设备

　　1)蜂王浆中葵烯酸检测分析液相色谱仪LC-600B整套系统由LC600B高压恒流泵：2台,SPD600B紫外检测器：1台,SCL600B系统控制器：1台,混合器：1只,7725i手动进样阀：1只,反控色谱工作站：1套(反控主机),液相色谱柱：1支(C18 4.6*250mn,5um),微量进样器：1支(50ul/100ul),进样支架：1只(进样阀用)等组成；安装、调试及使用都非常简单。

　　2)LC-P600高压恒流泵是微处理器智能控制的往复式双柱塞并联泵，具有工作压力高、脉动小、稳定可靠、操作方便等特点。其机械组件由电脑辅助设计，各主要零部件均在世界先进的数控加工中心制造，因此具有加工精确度高、泵体密封性能好、零件的互换性好等特点。

　　3)LC-UV600紫外检测器采用了平行的双锥孔流通池，样品池和参照池完全处于对等的条件。锥孔设计的流通池，可以在同样的池体积情况下，提高通过池孔的光能量，明显降低了仪器的静态噪音和信号漂移。

　　仪器主要配置

　    1、LC-3000高效液相色谱仪;

　　2、色谱柱：C18，250*4.6*10或250*4.6*5;

　　3、高速离心机(大于4500r/min；50ml);

　　4、超声波震荡仪;

　　5、涡旋混合器;

　　6、分析天平(万分之一);

　　7、溶剂过滤器(带0.45um有机、水系过滤膜和真空泵);