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乳制品中黄曲霉毒素检测解决方案-AB SCIEX

http://www.testrust.com 检测通 时间:2014-09-13

【摘要】

黄曲霉毒素检测常见的方法为经免疫亲和柱净化后,采用HPLC(高效液相色谱法)、TLC(薄层层析法)、LC-MS/MS(液质联用)检测以及ELISA(酶联免疫)法。其中ELISA法使用较为普遍,但因其定量不准确,只能作为阳性样品的初筛工具。LC-MS/MS检测因其具有灵敏度高、快速、准确的特点,广泛应用于食品安全检测。

方案优势

采用标准

国标GB 5413.37-2010

方法/原理/步骤

  1.样品前处理方法

  适用于乳和乳制品中黄曲霉毒素的测定。

  ⑴提取方法:

  ①乳:

  称取50 g(精确至0.01 g)混匀的试样,置于50 mL具塞离心管中,在水浴中加热到35℃~37℃。在6000转/分钟下离心15 min。收集全部上清液,供净化用。

  ②发酵乳(包括固体状、半固体状和带果肉型):

  称取50 g(精确至0.01 g)混匀的试样,用0.5 mol/L的氢氧化钠溶液在酸度计指示下调pH值至7.4,在9500转/分钟下匀浆5 min,在水浴中加热到35℃~37℃。在6000转/分钟下离心15 min。收集全部上清液,供净化用。

  ③乳粉和粉状婴幼儿配方食品:

  称取10 g(精确至0.01 g)试样,置于250 mL烧杯中。将50 mL已预热到50℃的水加入到乳粉中,用玻璃棒将其混合均匀。如果乳粉仍未完全溶解,将烧杯置于50℃的水浴中放置30 min。溶解后冷却至20℃,移入100 mL容量瓶中,用少量的水分次洗涤烧杯,洗涤液一并移入容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀后分别移至两个50 mL离心管中,在6000转/分钟下离心15 min,混合上清液,用移液管移取50mL上清液供净化处理用。

  ④干酪:

  称取经切细、过10目圆孔筛混匀的试样5g(精确至0.01 g),置于50 mL离心管中,加2 mL水和30 mL甲醇,在9500转/分钟下匀浆5 min,超声提取30 min,在6000转/分钟下离心15 min。收集上清液并移入250 mL分液漏斗中。在分液漏斗中加入30 mL石油醚,振摇2 min,待分层后,将下层移于50 mL烧杯中,弃去石油醚层。重复用石油醚提取2次。将下层溶液移到100 mL圆底烧瓶中,减压浓缩至约2 mL,浓缩液倒入离心管中,烧瓶用乙腈-水溶液(1+4) 5 mL分2次洗涤,洗涤液一并倒入50 mL离心管中,加水稀释至约50 mL,在6000转/分钟下离心5 min,上清液供净化处理。

  ⑤奶油:

  称取5g(精确至0.01 g)试样,置于50 mL烧杯中,用20 mL石油醚将其溶解并移于250 mL具塞锥形瓶中。加20 mL水和30 mL甲醇,振荡30 min后,将全部液体移于分液漏斗中,待分层后,将下层溶液全部移到100 mL圆底烧瓶中,在旋转蒸发仪中减压浓缩至约5 mL,加水稀释至约50mL,供净化处理。

  ⑵净化方法

  ①免疫亲和柱的准备:

  将一次性的50 mL注射器筒与亲和柱上顶部相串联,再将亲和柱与固相萃取装置连接起来。

  ②试样的纯化:

  将上述样品提取液移至50 mL注射器筒中,调节固相萃取装置的真空系统,控制试样以2mL/min~3 mL/min稳定的流速过柱。取下50 mL的注射器筒,装上10 mL注射器筒。注射器筒内加入水,以稳定的流速洗柱,然后,抽干亲和柱。脱开真空系统,在亲和柱下部放入10 mL刻度试管,上部装上另一个10 mL注射器筒,加入4 mL乙腈,洗脱待测物,洗脱液收集在刻度试管中中,洗脱时间不少于60秒。然后用氮气缓缓地在30℃下将洗脱液蒸发至近干(如果蒸发至干,会损失待测物),用乙腈-水溶液(1+9)稀释至1 mL。

仪器设备

  2. LC-MS/MS仪器条件

  ①液相色谱参数:

  色谱柱:Phenomenex Luna PFP(2) 3µm,100Å, 50×2mm

  柱温:28℃

  流动相:含0.1%甲酸,甲醇/5mM乙酸铵水溶液(60:40)

  流速:0.4 mL/min

  进样量:10µL

  运行时间:3min

  ②质谱参数:

  以下参数以API 3200为例,具体参数和检测灵敏度视仪器不同而有差异

 

Analyte Name Q1 Q3 DP/V EP/V CE/eV CEP/V CXP/V Dwell time/ms
AflatoxinB1 1 313.1 241.1 56 7.5 47 22 5 100
AflatoxinB1 2 313.1 285.0 56 7.0 25 26 5 100
AflatoxinB2 1 315.1 259.1 61 9.0 39 26 5 100
AflatoxinB2 2 315.1 287.2 56 8.5 29 26 5 100
AflatoxinG1 1 329.0 243.0 51 12.0 31 16 5 100
AflatoxinG1 2 329.0 311.0 51 12.0 25 16 5 100
AflatoxinG2 1 331.1 245.1 56 12.0 41 18 5 100
AflatoxinG2 2 331.1 313.0 61 11.5 27 18 5 100
AflatoxinM1 1 329.1 273.0 53 10.0 31 12 5 100
AflatoxinM1 2 329.1 259.0 53 10.0 30 12 5 100

  离子源参数:

  CUR: 20 psi

  IS: 5500 V

  TEM: 425°C

  GS1: 30 psi

  GS2: 60 psi

  Ihe: On

  CAD: High

实验结果和结论

  实验结果

  黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2和M1提取离子流图如下:

  结论

  AB SCEIX提供的全方位解决方案可同时测定乳及乳制品中B1、B2、G1、G2和M1共5种黄曲霉毒素。

  AB SCIEX公司提供免费下载的用于测定黄曲霉毒素的iMethod,在Cliquid软件中安装后可直接使用。

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