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青岛艾力析实验科技有限公司

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检测认证人脉交流通讯录

黄曲霉毒素检测的解决方案

【摘要】

由艾力析实验科技有限公司开发研制的光化学衍生器PCD 1000,使用时置于HPLC柱和检测器之间,进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和/或响应的选择性。

方案优势

艾力析光化学柱后衍生器PCD 1000在线对黄曲霉毒素B1、G1进行衍生,不需要任何化学试剂,无需清洗仪器,减少对色谱仪的腐蚀,同时更好的保护操作人员,用于液相色谱荧光法检测黄曲霉毒素,有效提高检测的灵敏度。在黄曲霉毒素的检测中,它能够增强黄曲霉毒素B1和G1的荧光强度,黄曲 霉毒素B1和G1灵敏度能够达到0.1~0.5ppb

采用的标准

1、符合AOAC 2005.08,AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05,中国台湾标准(食字0981800370 号公告)和欧盟药典2.8.18标准分析方法要求 2、中国国家标准和进出口检验标准及2015版中国药典要求(增订光化学衍生法) 3、GB/T 30955-2014中饲料中黄曲霉毒素的检测方法

实现的方法/原理/步骤

一、营养米粉类婴幼儿辅食 婴幼儿正直身体发育时期,应该营养均衡搭配,提倡给婴幼儿吃大自然提供给人类的各种食物。而在这些食物中,婴幼儿米粉(又称“婴幼儿配方谷粉”、“营养米粉”或“婴幼儿米糊”),是母乳或婴儿配方食品不能满足婴儿营养需要以及婴儿断奶期间时,为补充婴幼儿营养的非常重要的辅助食品。由于营养米粉以小米、大米为主要原料,而小米和大米若储藏不当,极其容易受到黄曲霉毒素的污染。据不完全统计,2015年以来,国家食药监总局共公布了64批次存在食品安全风险的婴幼儿辅食,其中黄曲霉毒素等污染物超标达15批次。因此,企业和国家质检部门有必要加强对婴幼儿辅食中霉菌毒素的检测与监管,保障婴幼儿食品的安全。 针对婴幼儿营养米粉中黄曲霉毒素B1的检测,青岛艾力析实验科技有限公司为您提供了整套解决方案。满足我国婴幼儿食品中黄曲霉毒素B1(GB2761-2011)的限量标准0.5μg/kg的要求。 (1)色谱条件 色谱柱: C18 4.6*250mm(5um) 流动相:甲醇—水 (55/45,v/v) 柱温:25℃ 流速:0.8mL/min 进样量:20μL 检测器:荧光检测器 检测波长:EX(激发波长)=360nm,EM(发射波长)=420nm 进样前2min开启光化学衍生池电源 光化学衍生化系统:光化学衍生器(连接于色谱柱后,然后通向荧光检测器) (2)样品处理 提取 准确称取25.000g样品于500mL的具塞玻璃容量瓶中,加入125mL甲醇-水(体积比为70∶30)溶液; 在高速匀质机上匀质2~3min; 取30mL左右匀质后的样液以4000r/min离心5min; 取上层清液10mL加入30mL水稀释,摇匀后过玻璃纤维滤纸过滤,滤液备用。 SPE柱净化 回温解冻:提前办小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻; 安装:将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上; 上样:将提取的样品滤液全部转移到10mL玻璃注射器中,调节固相萃取装置上的压力控制阀,控制样品溶液以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体,弃去流出液; 淋洗:向玻璃注射器内加入10mL水淋洗免疫亲和柱,流速位1滴/s~2滴/s,淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有2~3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱; 洗脱:准确加入2.0mL流动相至注射器内,以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,于涡旋混合器上振荡1min,过0.45μm滤膜,供液相色谱测定。 (3)样品测定 HPLC直接进样,经C18色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1的浓度; (4) 配置 产品名称及规格 数量 黄曲霉素B1免疫亲和柱3ml,25支/盒 1盒 黄曲霉素B1标准溶液(100μg/L),4~8℃保存 1盒 光化学柱后衍生反应装置 1套 C18 250 x 4.6 mm 1根 固相萃取装置,用于免疫亲和柱操作 (含气泵 转换头等配件,多用连接头是选配) 1套 固相萃取装置转接头 若干 二、乳制品 黄曲霉毒素有20多个种类,其中B1是最常见的种类,由黄曲霉等真菌直接代谢产生。B1随着饲料进入牛体内后,会被转换为M1——另一种黄曲霉毒素。M1比B1毒性小一些,但基本机理一致。一部分M1会进入乳液和尿液,奶牛通过饲料途径食入的黄曲霉毒素B1,约有1.35%以M1的形式进入乳中。目前中国对婴幼儿乳品及牛奶中黄曲霉毒素M1的限量标准是<0.5μg/kg。针对牛奶和奶粉中黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2检测,青岛艾力析实验科技有限公司提供了整套解决方案。 (1)色谱条件 色谱柱: C18 4.6*250mm(5um) 流动相:甲醇—乙腈—水 (25/20/55,v/v) 柱温:30℃ 流速:1.0 mL/min 进样量:20μL 检测器:荧光检测器 检测波长:EX(激发波长)=355nm,EM(发射波长)=430nm 进样前2min开启光化学衍生池电源 光化学衍生化系统:光化学衍生器(连接于色谱柱后,然后通向荧光检测器) (2)样品处理 提取 准确称取2.0000g奶粉样品,置于50mL的离心管中。将20mL已预热到50℃的水加入到奶粉中,边加边振摇至奶粉完全溶解; 在涡旋混合器上振荡2min混合均匀; 将奶粉乳浊液冷却至室温后,于10000r/min、在-5℃下离心10min; 取30mL左右匀质后的样液以4000r/min离心5min; 将样品溶液用玻璃纤维滤纸过滤,滤液备用。 SPE柱净化 回温解冻:提前办小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻; 安装:将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上; 上样:将提取的样品滤液全部转移到10mL玻璃注射器中,调节固相萃取装置上的压力控制阀,控制样品溶液以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体,弃去流出液; 淋洗:向玻璃注射器内加入10mL水淋洗免疫亲和柱,流速位1滴/s~2滴/s,淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有2~3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱; 洗脱:准确加入1.0mL流动相至注射器内,以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,用水定容到2mL。于涡旋混合器上振荡1min,过0.45μm滤膜,供液相色谱测定。 (3)样品测定 HPLC直接进样,经C18色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2、M1和M2的浓度; (4) 配置 产品名称及规格 数量 黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2免疫亲和柱3ml,25支/盒 1盒 黄曲霉素B1、B2、G1、G2、M1、M2标准溶液(60μg/L),4~8℃保存 1盒 光化学柱后衍生反应装置 1套 C18 250 x 4.6 mm 1根 固相萃取装置,用于免疫亲和柱操作 (含气泵 转换头等配件,多用连接头是选配) 1套 固相萃取装置转接头 若干 三、粮油 目前, 粮油食品的生物性污染问题随着食品质量安全问题而日益受到人们的普遍关注。真菌毒素的污染是导致食品污染的主要因素之一。据联合国粮农组织估计, 全世界谷物供应25% 受真菌毒素污染而不能食用。真菌毒素种类多, 其中黄曲霉毒素是迄今发现污染农产品毒性最强的一类生物毒素,也是强致癌物, 国家标准中对其有严格限定。因此掌握黄曲霉毒素检测方法和防治措施, 对保障粮油食品质量安全尤为重要。 针对粮油中黄曲霉毒素的检测,青岛艾力析实验科技有限公司为您提供了整套解决方案。 (1)色谱条件 色谱柱: C18 4.6*150mm(5um) 流动相:甲醇—水 (50/50,v/v) 柱温:30℃ 流速:1.0 mL/min 进样量:20μL 检测器:荧光检测器 检测波长:EX(激发波长)=360nm,EM(发射波长)=440nm 进样前2min开启光化学衍生池电源 光化学衍生化系统:光化学衍生器(连接于色谱柱后,然后通向荧光检测器) (2)样品处理  提取  准确称取25.000g粮、油样品于500mL锥形瓶中,加入5g氯化钠、加入125mL甲醇水(体积比为70∶30);  在高速匀质机上匀20mL水稀释,摇匀后过玻璃纤维滤纸过滤,滤液备用。  SPE柱净化  回温解冻:提前办小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻;  安装:将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上;  上样:将提取的样品滤液全部转移到10mL玻璃注射器中,调节固相萃取装置上的压力控制阀,控制样品溶液以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体,弃去流出液;  淋洗:向玻璃注射器内加入10mL水淋洗免疫亲和柱,流速位1滴/s~2滴/s,淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有2~3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱;  洗脱:准确加入1.0mL甲醇至注射器内,以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的B1洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,加入1.0mL纯水于洗脱液中,于涡旋混合器上振荡1min,过0.45μm滤膜,供液相色谱测定。 (3)样品测定 HPLC直接进样,经C18色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度; (4) 配置 产品名称及规格 数量 黄曲霉素B1、B2、G1、G2免疫亲和柱3ml,25支/盒 1盒 黄曲霉素B1、B2、G1、G2标准溶液(100μg/L),4~8℃保存 1盒 光化学柱后衍生反应装置 1套 C18 250 x 4.6 mm 1根 固相萃取装置,用于免疫亲和柱操作 (含气泵 转换头等配件,多用连接头是选配) 1套 固相萃取装置转接头 若干 四、花生及其制品 黄曲霉菌广泛存在于土壤中,菌丝生长时产生毒素,而花生是最容易感染黄曲霉毒素的食品之一。因此必须对花生及其制品中黄曲霉毒素进行检测,以保证饮食的安全。 针对花生及其制品中黄曲霉毒素的检测,青岛艾力析实验科技有限公司提供了整套解决方案。 (1)色谱条件 色谱柱: C18 4.6*150mm(5um) 流动相:甲醇—水 (55/45,v/v) 柱温:25℃ 流速:0.8mL/min 进样量:50μL 检测器:荧光检测器 检测波长:EX(激发波长)=360nm,EM(发射波长)=420nm 进样前2min开启光化学衍生池电源 光化学衍生化系统:光化学衍生器(连接于色谱柱后,然后通向荧光检测器) (2)样品处理  提取  准确称取25.000g粉碎样品于500mL的锥形瓶中,加入125mL甲醇-水(体积比为70∶30)溶液;  在高速匀质机上匀质2~3min;  取30mL左右匀质后的样液以4000r/min离心10min;  用槽纹滤纸过滤试样溶液于50mL量筒中;  收集滤液15mL,加入30mL二次去离子水,混匀,将稀释后的滤液用玻璃纤维滤纸再次过滤。  SPE柱净化  回温解冻:提前办小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻;  安装:将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上;  上样:将提取的样品滤液15mL转移到玻璃注射器中,调节固相萃取装置上的压力控制阀,控制样品溶液以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体,弃去流出液;  淋洗:向玻璃注射器内加入10mL去离子水淋洗免疫亲和柱,流速位1滴/s~2滴/s,淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有2~3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱;  洗脱:加入1.0mL甲醇至注射器内,以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,并加入1mL去离子水,于涡旋混合器上振荡1min,过0.45μm滤膜,供液相色谱测定。 (3)样品测定 HPLC直接进样,经C18色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度; (4)配置 产品名称及规格 数量 黄曲霉素B1、B2、G1、G2免疫亲和柱3ml,25支/盒 1盒 黄曲霉素B1、B2、G1、G2标准溶液(100μg/L),4~8℃保存 1盒 光化学柱后衍生反应装置 1套 C18 150 x 4.6 mm 1根 固相萃取装置,用于免疫亲和柱操作 (含气泵 转换头等配件,多用连接头是选配) 1套 固相萃取装置转接头 若干 五、饲料 黄曲霉毒素属剧毒物质,是迄今发现的最强的化学致癌物,并且具有强烈的致畸、致突变作用。动物饲料中玉米、花生饼、棉籽饼等黄曲霉毒素的含量常常超过国家《饲料卫生标准》中的最高限量。因此,在饲料生产过程中对黄曲霉毒素的含量及其毒性进行有效的系统控制显得尤为重要。 严格控制生产到销售的各个环节,认真做好饲料的安全检测,可起到防微杜渐的作用。 真菌毒素是由产毒真菌产生的代谢物,其广泛存在于饲料中。在适宜的温、湿度条件下,这些产毒真菌就会生长繁殖,产生真菌毒素;真菌毒素也可能因畜禽食用了含真菌毒素的粮食而进入其乳、蛋中从而再次带入食物链。 在众多真菌毒素中,黄曲霉毒素是目前发现存在范围最广、毒性最大的毒素。 根据GB/T 30955-2014中饲料中黄曲霉毒素的检测方法,青岛艾力析实验科技有限公司提供完整的解决方案。 (1)色谱条件 色谱柱: C18 4.6*150mm(5um) 流动相:甲醇—水 (45/55,v/v) 柱温:30℃ 流速:0.8mL/min 进样量:20μL 检测器:荧光检测器 检测波长:EX(激发波长)=360nm,EM(发射波长)=420nm 进样前2min开启光化学衍生池电源 光化学衍生化系统:光化学衍生器(连接于色谱柱后,然后通向荧光检测器) (2)样品处理  提取  准确称取50.0g粉碎样品于500mL的锥形瓶中,加入5.0g氯化钠,并准确加入100 mL甲醇-水(体积比为80∶20)溶液;  在高速匀质机上匀质2~3min;  用定量滤纸过滤试样溶液于100mL玻璃烧杯中;  准确移取滤液10mL,加入40mLPBS缓冲溶液稀释,将稀释后的滤液用玻璃纤维滤纸过滤1-2次,直至滤液澄清,备用。  SPE柱净化  回温解冻:提前办小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻;  安装:将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上;  上样:将提取的样品滤液10mL转移到玻璃注射器中,调节固相萃取装置上的压力控制阀,控制样品溶液以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体,弃去流出液;  淋洗:向玻璃注射器内加入10mL去离子水淋洗免疫亲和柱,流速位1滴/s~2滴/s,淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有2~3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱;  洗脱:加入1.0mL甲醇至注射器内,以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,并加入1mL去离子水,于涡旋混合器上振荡1min,过0.45μm滤膜,供液相色谱测定。 (3)样品测定 HPLC直接进样,经C18色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度; (4)配置 产品名称及规格 数量 黄曲霉素B1、B2、G1、G2免疫亲和柱3ml,25支/盒 1盒 黄曲霉素B1、B2、G1、G2标准溶液(100μg/L),4~8℃保存 1盒 光化学柱后衍生反应装置 1套 C18 150 x 4.6 mm 1根 固相萃取装置,用于免疫亲和柱操作 (含气泵 转换头等配件,多用连接头是选配) 1套 固相萃取装置转接头 若干 六、中药材 为进一步加强中药材的质量控制,国家食品药品监督管理局,在2015版《中国药典》中进一步增加中药的安全性指标控制项目,尤其是加强对中药材中重金属及有害元素、黄曲霉毒素、农药残留的控制。《中国药典》对中药材的规定限度为黄曲毒素B1不得超过5μg/kg;黄曲霉毒素G1、黄曲霉毒素G2、黄曲霉毒素B2总量不得超过10μg/kg。 (1)色谱条件 色谱柱: C18 4.6*150mm(5um) 流动相:甲醇—水 (45/55,v/v) 柱温:30℃ 流速:0.8mL/min 进样量:20μL 检测器:荧光检测器 检测波长:EX(激发波长)=360nm,EM(发射波长)=420nm 进样前2min开启光化学衍生池电源 光化学衍生化系统:光化学衍生器(连接于色谱柱后,然后通向荧光检测器) (2)样品处理  提取  称取供试品粉末约5g(过二号筛),于50mL离心管中,加入5.0g氯化钠,并准确加入25 mL甲醇-水(体积比为70∶30)溶液;  在高速匀质机上匀质5min;  均质完成后,以4000r/min离心5min;  量取上清液15mL,置50mL容量瓶中,用去离子水稀释至刻度,摇匀;  用玻璃纤维滤纸滤过,滤液,备用。  SPE柱净化  回温解冻:提前办小时将黄曲霉毒素免疫亲和柱从冰箱拿出常温解冻;  安装:将回温解冻后的免疫亲和柱安装到固相萃取装置上;  上样:将提取的样品滤液20mL转移到玻璃注射器中,调节固相萃取装置上的压力控制阀,控制样品溶液以1滴/s的速度通过免疫亲和柱,直至2~3mL空气通过柱体,弃去流出液;  淋洗:向玻璃注射器内加入20mL去离子水淋洗免疫亲和柱,流速位1滴/s~2滴/s,淋洗液两次。直至空气进入免疫亲和柱后有2~3mL空气通过柱体,弃去全部的流出液,抽干小柱;  洗脱:加入1.0mL甲醇至注射器内,以约为1滴/s的流速将免疫亲和柱上的黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2洗脱下来,收集全部的洗脱液于干净的玻璃离心管中,并加入1mL去离子水,于涡旋混合器上振荡1min,过0.45μm滤膜,供液相色谱测定。 (3)样品测定 HPLC直接进样,经C18色谱柱、光化学柱后衍生化后荧光检测器直接记录并计算出黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的浓度

采用的仪器设备

由青岛艾力析实验科技有限公司开发研制的光化学衍生器PCD1000,使用时置于HPLC柱和检测器之间,进行柱后连续光化学衍生反应提高荧光、紫外、电化学检测和化学发光检测器的灵敏度和/或响应的选择性。该衍生器包括下列组件:紫外光源(254nm)、衍生管路、反应支架、保护外壳、HPLC接口。 产品特点 (1)无需使用化学物质(节约成本的同时,也避免操作人员接触有毒化学物质); (2)较传统柱后衍生装置(化学衍生泵、混合器、温控装置)成本低; (3)直接连接于色谱柱与荧光检测器之间,安装操作简单; (4)外观设计精巧细致,节省实验室空间; (5)完全采用进口配件,保证了产品的使用性能; (6)采用PHILIP进口紫外灯光源,使用寿命长达8000h; (7)采用专利的支架和管线缠绕方式,保证了反应效率; (8)可与国内外各种品牌及型号的荧光检测器联用; (9)无腐蚀性酸流经毛细管,增加HPLC仪器的寿命; (10)可持续工作数千小时,用后无需冲洗步骤; (11)黄曲霉毒素B1、B2、G1、G2的最低检测限均小于0.5 ppb; (12)符合 AOAC 2005.08, AOAC 2008.02,AOCS Aa 11-05 ,中国台湾标准(食字 0981800370 号公告)和欧盟药典2.8.18 标准分析方法要求; (13)符合中国国家标准和进出口检验标准及2015版中国药典要求(增订光化学衍生法); 产品参数 设备尺寸:411mm×53mm×68mm(长×宽×高) 净重: kg 毛重: kg 管线有效长度:25m 出入端管线长度:≤500mm 紫外灯寿命:≥4000 工作电源:220V、50Hz 工作功率:11W 环境温度:0~45℃ 环境要求:严禁浸水、淋水,内含易碎物质避免冲击及跌落。


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