10个高效液相色谱应用实例—南京科捷分析仪器有限公司
例1.稠环芳烃分析(环境气体分析)
样 品:含六苯并苯等8种稠环芳烃的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站
检测器:UV紫外检测器,340nm
色谱柱:C18键合相(ODS-224),5μm,柱长25cm,柱径4.6mm
流动相:甲醇-二氯甲烷(8:2)混合溶剂
流 速:1mL/min
进 样:20μL
结 果:所有组分在25min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:六苯并苯,二苯二萘嵌苯,三苯二萘嵌苯,苯萘并二萘嵌苯,四苯二萘嵌苯,萘六苯并苯,二苯萘并二萘嵌苯,苯菲并五苯。
例2.磺胺分析(药物)
样 品:磺胺、磺胺嘧啶、磺胺甲基异噁唑和甲氧苄氨嘧啶的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,740色谱数据处理机
检测器:UV 481型紫外检测器,波长240nm
色谱柱:μ-Bondapak C18 , 5μm,柱长25 cm,柱径4.6 mm
流动相:由KH2PO4(0.05mol/L)和Na2HPO4(0.05 mol/L)以及MeOH所组成,其用量比例为200:10:165,
流 速:1mL/min
进 样:10μL
结 果:所有组分在6min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:磺胺保留时间为2.60 min, 磺胺嘧啶保留时间为3.18 min、磺胺甲基异噁唑保留时间为4.33 min,甲氧苄氨嘧啶保留时间为5.19min。
例3.茶碱分析(茶叶)
样 品:含茶碱等三种物质的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站
检测器:UV紫外检测器,280nm
色谱柱:Micro μBondapak C18 ,8μm,柱长25 cm,柱径4.6 mm
流动相:二甲基二酰胺:甲醇:醋酸:水 = 23.5:1:0.5:75(v/v)
流 速:1mL/min
进 样:10μL
结 果:所有组分8min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为可可碱,峰2为茶碱,峰3为咖啡碱。
例4.银杏内酯分析(药物分析)
样 品:含银杏苦内酯等4种物质的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪
配有570自动进样器,Rheadyane 77251进样阀,HP化学工作站
检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为91℃,氮气流速为2.75L/min
色谱柱:Platinum OPS,5μm,柱长25cm,柱径4.6mm
流动相:水:甲醇:四氢呋喃 = 75:20:10
流 速:1mL/min
进 样:10μL
结 果:所有组分在15min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为银杏苦内酯C, 峰2为白果内酯, 峰3银杏苦内酯A, 峰4为银杏苦内酯B。
例5.脂肪酸甲酯分析(药物分析)
样 品:含5种脂肪酸甲酯的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站
检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为45℃,氮气流速为1.5L/min
色谱柱:Silver Impregnated Ion-Exchange ,柱长25cm,柱径4.6mm
流动相:乙腈:甲醇 = 2:98
流 速:0.75mL/min
进 样:10μL
结 果:所有组分在10min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为C18:0脂肪酸甲酯,峰为C18:1脂肪酸甲酯,峰3为C18:2脂肪酸甲酯,峰4为C18:3脂肪酸甲酯,峰1为C20:4脂肪酸甲酯。
例6.脂肪酸直接分析
样 品:未经衍生处理的亚麻酸等6组分的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站
检测器:500型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为65℃,氮气流速为2.0L/min
色谱柱:AlltimaTM C18 ,5μm,柱长25cm,柱径2.1mm
流动相:A为水,B为乙腈
梯 度 时间 0min 10min 15min 20min
A 13% 20% 20% 5%
B 77% 80% 80% 95%
流 速:0.4mL/min
进 样:20μL
结 果:所有组分20min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为亚麻酸,峰2为肉豆蔻酸,峰3为亚油酸,峰4为棕榈酸,峰5为油酸,峰6为硬脂酸。
例7:氨基酸衍生物分析(食品分析)
样 品:22种氨基酸的苯基乙酰硫脲混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,梯度洗脱装置,色谱工作站
检测器:UV紫外检测器,波长254nm
色谱柱:柱长25cm,柱径0.46cm Zorbax ODS柱(Dupont)
流动相:A液为0.01mol/L的NaAc, pH =4.5
B液为CH3CN
梯 度:0min~6min B/A = 24/76~42/58(v/v)
6min~14min B/A = 42/58(v/v)
14min~20min B/A = 24/76(v/v)
流 速:1mL/min
进 样:自动进样器进样10μL
结 果:所有组分在20min之内全部流出,各组分完全分离,组分出峰顺序为:峰1为ASP,峰2为GLU,峰3为ASN,峰4为SER,峰5为GLN,峰6为THR,峰7为GLY,峰8为MET·SO2 ,峰9为HYP, 峰10为ALA,峰11为TYR,峰12为HIS,峰13为CYS(CH2),峰14为VAL,峰15为MET,峰16为PRO,峰17为TRP,峰18为LYS,峰19为PHE,峰20为ILE,峰21为LEU,峰22为ARG。
例8.氨基酸直接分析
样 品:12种未衍生氨基酸混合物溶液(1mMol/L)
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵
配有二极管阵列检测器、蒸发光散射检测器和化学工作站
检测器:500型ELSD蒸发光散射检测器
漂移管温度为95℃,氮气流速2.5L/min
色谱柱:Alltima C18 , 5μm,柱长25cm,柱径4.6mm
流动相:A为含0.1% TFA的水
B为含0.1% TFA的乙腈
梯 度: 时间 0min 5min 20min
A液 100% 100% 60%
B液 0% 0% 40%
流 速:0.6mL/min
进 样:20μL
结 果:所有组分在25min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序为:峰1为丝氨酸,峰2为赖氨酸,峰3为谷氨酸,峰4为精氨酸,峰5为脯氨酸,峰6为缬氨酸,峰7为甲硫氨酸,峰8为酪氨酸,峰9为异亮氨酸,峰10为亮氨酸,峰11为苯丙氨酸,峰12为组氨酸。
例9.糖类分析(食品分析)
样 品:含果糖等6种糖类物质的混合物
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,四元梯度泵,色谱工作站
检测器:Mark ⅡA型ELSD Alltech 蒸发光散射检测器
漂移管温度为100℃,氮气流速为2.2L/min。
色谱柱:Absorbosphere, NH2 ,柱长25cm,柱径4.6mm
流动相:A为乙腈,B为水
梯 度:时间 0min 20min
A 85% 75%
B 15% 25%
流 速:1.5mL/min
进 样:20μL
结 果:所有组分在24min之内全部流出,各组分完全分离,组分流出顺序依次为:峰1为果糖,峰2为葡萄糖,峰3为蔗糖,峰4为麦芽糖,峰5为乳糖,峰6为棉籽糖。
例10.嘌呤分析(药物)
样 品:取1mL血浆加入200μL的1.98mol/L的高氯酸(GR),再加入600μL蒸馏水和200μL的1.47mol/L的别嘌呤醇(内标),用旋转混合器振摇10s于1200g离心10min,取上层清液备分析用。
色谱仪:“南京科捷LC600”液相色谱仪,配有色谱工作站
检测器:UV紫外检测器,254nm
色谱柱:μBondapsk C18 ,10μm,柱长30cm,柱径3.9mm
流动相:0.02mol/L的磷酸二氢钾,pH = 2.2
流 速:2.0mL/min
进 样:10μL
结 果:所有组分在12min之内全部流出,各组分分离完全,保留时间依次为:尿嘌呤为3.18min(峰1),腺嘌呤为3.21 min(峰2),次黄嘌呤为3.90 min(峰3),5-羟基吡嗪酸为4.75min(峰4),5-羟基吡嗪胺为5.31 min(峰5),黄嘌呤为5.90 min(峰6),吡嗪酸为7.35min(峰7),内标别嘌呤醇为8.53min(峰8),吡嗪胺为9.57min(峰9)。
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10个高效液相色谱应用实例—南京科捷分析仪器有限公司