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上海笃玛生物科技有限公司

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笃玛 兔肌酸激酶(CK) ELISA 试剂盒 产品简介

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  • 品  牌:
  • DM
  • 主要规格:
  • 96T/48T
  • 用  途:
  • 科研
    • 笃玛 兔肌酸激酶(CK) ELISA 试剂盒 产品简介 常用标签包括有Flag、myc、HA、His、GST、GFP、MBP等。 Flag标签系统利用一个短的亲水性八氨基酸肽(DYKDDDDK)融合到目标蛋白;其纯化条件是非变性的,因此可以纯化所有有活性的融合蛋白。 His标签是由6个组氨酸(His-His-His-His-His-His)组成的短肽,专门设计用于重组蛋白的吸附纯化。由于分子量小,且较容易分离和纯化,是目前使用最广泛的一种。 GST标签体系具有蛋白表达率高,表达产物纯化方便,利于GST抗体制备的特点。GST融合蛋白在水溶液中可溶,可从细菌裂解液中提取,在不变性的条件下通过亲和层析得到。 GFP或其突变体EGFP等广泛用于基因表达效率的检测,以及和目的蛋白融合表达用于检测目的蛋白的表达和分别。GFP抗体不经可以检测GFP或其适当的突变体,也可以检测和GFP或其适当的突变体融合表达蛋白的表达、细胞内定位,以及纯化、定性或定量检测GFP融合表达蛋白等。 Myc标签(序列为:EQKLISEEDL)已成功应用于WB杂交技术、免疫沉淀IP和流式细胞术中。因此可用于检测重组蛋白在细菌、酵母、昆虫细胞和哺乳细胞中的表达情况。Myc重组蛋白质可通过偶联Myc标签抗体到活化的琼脂糖上而进行亲和纯化。但Myc重组蛋白的低pH洗脱条件往往会降低蛋白质的活力,因此Myc标签系统广泛应用于检测但很少用于纯化。 HA标签系统利用一个HA(influenza hemagglutintin epitope:YPYDVPDYA)短肽融合到目标蛋白。HA标签可位于蛋白质的C端或N端,该系统已广泛应用于多种细胞类型,相应的HA标签抗体也被广泛运用。 MBP标签蛋白大小为40kDa,由大肠杆菌K12的malE基因编码。MBP可增加在细菌中过量表达的融合蛋白的溶解性,尤其是真核蛋白。如果蛋白在细菌中表达,MBP可以融合在蛋白的N端或C端。可用MBP抗体或表达的目的蛋白特异性抗体检测MBP标签标记的重组蛋白。 其余标签抗体还有V5、GFP、RFP、β-Actin、β-Tubulin、GAPDH、ERK1、AU1、Avi、B、CBP、DDDDK、E、E2、Glu-Glu、HAT、HPC4、HSV、KT3、KLH、MAT、Protein A、S、S1、SNAP、SRT、NWSHPQFEK、SUMO、T7、Tag-100、TAP、Trx、Ty1、TF、Universal、VSV-G等,但应用相对较少。 笃玛 兔肌酸激酶(CK) ELISA 试剂盒 产品简介 ELISA 实验步骤: 1.包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC过夜,洗净。 2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37oC1h,洗净。 3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔,37oC 30分钟,洗净。 4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔,37oC 40分钟,洗净。 5.显色:TMB显色 A液:四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍. B液:5ul加蒸馏水12.5ml 。 终止液:2N硫酸 A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴。 6.450nm 波长测OD值 笃玛 兔肌酸激酶(CK) ELISA 试剂盒 产品简介 Elisa试验操作中可能影响结果的原因及其相应的解决办法 1 选择试剂 选择质量优良的检测试剂,严格按照试剂说明书进行操作,操作前将试剂在室温下平衡至少30分钟。 2 加样 可能原因: 1)血清或血浆标本分离不好即进行加样; 2)手工操作中,加样板过多造成加样后放入孵箱前等待时间过长(特别是室内温度较高时); 3)加完标本再加酶试剂时酶溅出孔外。解决办法: 1) 标本为血清:将血液先自然存放1-2小时后,再用3000rmp离心15分钟;标本为血浆:必须使用含抗凝剂的血液标本收集管,采血后必须立即颠倒采血管混合5-10次,放置一段时间后,3000rpm离心15分钟;若在几天内检测,可放在2-8℃冰箱中,若要贮存,则置于-20℃的低温冰箱内。 2) 加样后及时放入孵箱。 3) 加酶试剂后用吸水纸在酶标板表面轻拭吸干。 4) 如果采用AT或其他全自动加样,最好选择FAME或其他后处理仪器加酶试剂。 5) 标本较多时,请分批操作。 3 孵育 可能原因: 1) 孵育时未贴封片或加盖,使标本或稀释液蒸发,吸附于孔壁,难于清洗彻底; 2) 孵育时间人为延长,导致非特异性结合紧附于反应孔周围,难以清洗彻底。解决办法: 1) 贴封片或加盖; 2) 按说明步骤严格控制操作时间。 4 洗板 可能原因: 1) 采用手工洗板,孔与孔之间液体交叉。 2) 采用半自动洗板机洗板时,洗液量不足,导致洗板不彻底;洗板针堵塞,抽吸不完全;洗板不畅,导致洗板效果差。 3) 反应板过多造成洗板等待时间长。 解决办法: 1) 保证洗液注满各孔,洗板针畅通,洗完板后最好在吸水纸(选择干净、无或少尘的吸水材料)上轻轻拍干; 2) 合理安排,或多用几台洗板机。 5 显色 可能原因: 1) 显色剂配制后放置时间过长或使用过期显色剂; 2) 加显色剂时溅出孔外造成液体回流。解决办法: 1) 显色剂尽量在临用前配制,坚持不用过期显色剂,肉眼可见浅蓝色的TMB显色剂不用; 2) 加样时保持显色剂不外流; 3) A、B液应避免接触金属器械。 6 终止 可能原因如加终止液时产生较多气泡,导致假阳性增加。所以在加终止液时应避免产生气泡。 7 读板 如读板时板底不清洁等。应保证酶标板清洁。 在整个操作过程中保证酶标板不接触次氯酸;尽可能实现ELISA检测标准自动化,有效提高检测质量。在实际操作中,除了选择优良试剂外,必须严格按照操作步骤进行操作,同时做好室内质控、室间质评,以严谨的工作作风检测每一份标本,才能保证检测质量。

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