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笃玛 犬去甲肾上腺素(NA/NE) ELISA 试剂盒 产品介绍
- 犬去甲肾上腺素(NA/NE) ELISA 试剂盒
试剂盒性能
1. 准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
2. 灵敏度:最低检测浓度小于1.0 pg/mL。
3. 特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
4. 重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
5. 贮藏:2-8℃,避光防潮保存。
6. 有效期:6个月
犬去甲肾上腺素(NA/NE) ELISA 试剂盒
操作步骤
1. 从室温平衡20min后的铝箔袋中取出所需板条,剩余板条用自封袋密封放回4℃。
2. 设置标准品孔和样本孔,标准品孔各加不同浓度的标准品50μL;
3. 样本孔先加待测样本10μL,再加样本稀释液40μL;空白孔不加。
4. 除空白孔外,标准品孔和样本孔中每孔加入辣根过氧化物酶(HRP)标记的检测抗体100μL,用封板膜封住反应孔,37℃水浴锅或恒温箱温育60min。
5. 弃去液体,吸水纸上拍干,每孔加满洗涤液,静置1min,甩去洗涤液,吸水纸上拍干,如此重复洗板5次(也可用洗板机洗板)。
6. 每孔加入底物A、B各50μL,37℃避光孵育15min。
7. 每孔加入终止液50μL,15min内,在450nm波长处测定各孔的OD值。
犬去甲肾上腺素(NA/NE) ELISA 试剂盒
ELISA 实验步骤:
1.包被抗原:稀释液pH 9.6 碳酸盐缓冲液,多肽浓度2ug/ml,0.1ml/孔,4oC过夜,洗净。
2.1%BSA (pH 9.6 碳酸盐缓冲液) 封闭,0.1ml/孔,37oC1h,洗净。
3.稀释抗血清(可稀释不同浓度) 0.1ml/孔,37oC 30分钟,洗净。
4.稀释辣根过氧化物每标记的二抗0.1ml/孔,37oC 40分钟,洗净。
5.显色:TMB显色
A液:四甲基联苯胺10mg 溶于DMF1ml中,再用pH5.0柠檬酸缓冲液稀释100倍.
B液:5ul加蒸馏水12.5ml 。
终止液:2N硫酸
A液、B液各一滴,比光显色10分钟,终止液一滴。
6.450nm 波长测OD值
犬去甲肾上腺素(NA/NE) ELISA 试剂盒
酶联免疫试验步骤
将所需试剂从4℃冷藏环境中取出,置于室温平衡30min以上, 洗涤液冷藏时可能会有结晶需恢复到室温以充分溶解,每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的微孔板及框架,将不用的微孔板放入自封袋,保存于2-8℃。
编 号:将样本和标准品对应微孔按序编号,每个样本和标准品做2孔平行,并记录标准孔和样本孔所在的位置。
加样反应:加标准品或样本50μl/孔到各自的微孔中,然后加酶标记物50μl/孔,再加入50μl/孔的抗体工作液,用盖板膜封板,轻轻振荡5秒混匀,25℃反应30分钟。
洗 涤:小心揭开盖板膜,将孔内液体甩干,用工作洗涤液250μl/孔充分洗涤5次,每次间隔30秒,用吸水纸拍干(拍干后未被清除的气泡可用干净的枪头刺破)。
显 色:每孔加入底物液A 50μl,再加底物液B 50μl,轻轻振荡5秒混匀,25℃避光显色15分钟(若蓝色过浅,可适当延长反应时间)。
终 止:每孔加入终止液50μl,轻轻振荡混匀,终止反应。
测吸光值:用酶标仪于450nm处测定每孔吸光度值(建议用双波长450/630nm)。测定应在终止反应后10分钟内完成。