1、SRANKL试剂盒实验原理
SRANKL试剂盒是一种酶联放大的两步夹心法免疫检测试剂盒。在此实验中,标准品、质控品和未知样品在包被了抗IGFBP-3单克隆抗体的微孔板中温育。温育之后洗板,再加入辣根过氧酶标记的抗IGFBP-3抗体。第二次温育后再洗板,再向微孔中加入TMB底物液。之后再加入酸性终止液,用双波长450nm和620nm检测底物的酶反应程度。
检测到的OD值直接与样品中IGFBP-3的浓度成正比。实验使用了一套IGFB-3标准品,用标准的OD值对IGFBP-3的浓度可做出一条标准曲线,之后质控品和未知样品中的IGFBP-3浓度就可以从此标准曲线上定量得到。
2.成分
胰岛素样生长因子结合蛋白-3试剂盒为96孔检测提供了足够的试剂成份。每个试剂盒包括如下试剂成份:
试剂 |
体积/规格 |
颜色 |
重溶 |
酶标板,96孔,包被了抗IGFBP3单克隆抗体 |
96孔 |
蓝色 |
即用型 |
酶联物 HRP标记的抗IGFBP3单克隆抗体于Tris缓冲液中,及牛血清蛋白和百里香酚 |
1瓶 0.5ml |
红色 |
使用酶联物缓冲液20倍稀释 |
酶联物缓冲液 Tris缓冲液,及牛血清蛋白和百里香酚 |
1瓶 10ml |
红色 |
即用型 |
标准品1—5 于磷酸盐缓冲液中,及牛血清蛋白和百里香酚。准确的值请看瓶上标签 标准品是预稀释的 使用稀释缓冲液作为零标准品 |
5瓶 冻干品 |
黄色 |
加入1ml蒸馏水 |
稀释缓冲液 磷酸盐缓冲液及牛白蛋白、牛血清和百里香酚 |
1瓶 100ml |
黑色 |
即用型 |
质控品1、2 含人清及百里香酚 质控品是预稀释 |
2瓶 冻干品 |
银色 |
加入1ml蒸馏水 |
浓缩的洗涤液
|
1瓶 10ml |
棕色 |
使用蒸馏水进行200倍稀释(建议使用一个电磁搅拌器) |
TMB底物液 四甲基联苯胺 |
1瓶 12ml |
白色 |
即用型 |
终止液 Hcl 1.0N |
1瓶 12ml |
黑色 |
即用型 |
注意:使用稀释缓冲液作为零标准品
标准品的校准是使用NIBSC/WHO 重溶的IGFBP-3,参考试剂编号93/560。
3.没有提供的材料
1 好质量的蒸馏水
2 移液器 50ul、100ul、1ml(使用一次性吸嘴)
3 塑料管,用于样本稀释
4 混合器
5 电磁搅拌器
6 洗板机
7 450nm酶标仪,参考波长650nm。
4.准备
标准品:
使用1ml的蒸馏水重溶标准品。使用稀释缓冲液作为零标准品。
质控品:
使用1ml的蒸馏水重溶质控品。
酶联物:
制备适当体积酶联物溶液,例如:100ul的20倍浓缩的酶联物加至2ml的酶联物缓冲液中。使用混合器混匀,建议临时制备。
洗涤液:
制备适当体积的即用型洗涤液,通过加入199份的蒸馏水至1份的200倍浓缩的洗涤液,使用一个电磁搅拌器混匀。
5.样本的制备
血清必须保存在2-8℃
如果实验没有在24小时内进行,建议分装保存在-20℃,避免反复冻融。使用前,所有的样本应该平衡至室温。建议使用前混匀样本。
不能使用溶血的样本。
6.实验步骤:
加入100ul的标准品、质控品、稀释的样本至相应的孔中
7.应用范围
该试剂盒为酶联免疫试验检测人清中的胰岛素样生长因子结合蛋白-3(IGFBP-3)。
更多访问:
http://www.craymeibio.cn/Products-24213759.html
https://www.chem17.com/st286595/erlist_1297457.html