检测认证人脉交流通讯录
- 小鼠脾细胞的提取分离培养步骤：
1.C57BL/6小鼠（6~8周）颈椎脱臼处死，迅速放入75%乙醇（v/v）浸泡5分钟，取出，置于超净台内的无菌培养皿中；
注意：后面所有操作均在超净台内完成，保持无菌操作。
2.用镊子夹起小鼠腹部皮肤，在小鼠左腹侧中部剪开小口，撕开皮肤，即可见红色长条状脾脏；
3.用镊子轻轻提起脾脏，用眼科剪分离脾脏下面的结缔组织，取出脾脏，放入盛有5mLRPMI1640完全培养基的无菌培养皿中；
4.将脾脏用眼科剪轻轻剪碎后，置于200目的细胞筛网上，用10mL注射器针芯轻轻研压脾脏，挤压完成后，吸取少量RPMI1640培养基冲洗细胞筛网，将脾细胞悬液冲洗至培养皿中；
注意：此步骤中所用的镊子与步骤3中的镊子分开使用。10mL注射液针芯采用一次性无菌包装的注射器；
5.用无菌移液管吸取培养皿中的脾细胞悬液，放入50mL无菌离心管中；
6.4℃条件下300×g离心5min，去上清，加入5mL红细胞裂解液，用移液管轻轻吹打均匀后，室温下裂解2分钟（保持轻轻振摇），加入15mLPBS混匀，4℃条件下300×g离心5min后弃上清，用PBS洗2遍，收集细胞，用RPMI1640完全培养基（含10%FBS，下同）重悬细胞；
7.用RPMI1640完全培养基调整细胞浓度为5.0×106cells/mL，备用。
RPMI1640培养基
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