药学院中心实验室

负责人：刘翠  电话：020-39943080

 

主要规格及技术指标

 

　　1.芯片表面温控精度：10×10-3℃

 

　　2.样品分析时间：1min-24 h

 

　　3.样品注射体积：4.17-2500μL

 

　　4.芯片位点间均一性：>98%

 

　　5.检测折射率范围：1.33-1.37

 

　　6.动态范围：1-40000

 

　　7.结合常数范围：103 - 3×106 1/Ms

 

　　8.解离常数范围：10-5 - 10-1 s-1

 

　　9.平衡亲和力：10-3- 10-12 M

 

　　10.检测极限：< 1pM

 

　　11.浓度范围(mol)：10-3- 10-11 M

 

　　12.浓度范围(质量)：20mg/ml - 200 pg/ml

 

　　13.折射分辨率折射分辨率：1 x 10-6

 

　　14.最小分子重量小于：100Da

 

　　15.基线噪声：<1RU

 

　　16.数据分析的曲线拟合有7种模型可选：

 

　　(1)Langmuir

 

　　(2)质量传递Langmuir

 

　　(3)二价分析物

 

　　(4)双分析物竞争

 

　　(5)双配体位点竞争

 

　　(6)变构结合

 

　　(7)基线漂移Langmuir

 

　　主要功能及特色

 

　　按分析物的种类分：

 

　　(1)蛋白—蛋白相互作用

 

　　(2)蛋白—多肽相互作用

 

　　(3)蛋白—小分子化合物相互作用

 

　　(4)核酸—蛋白相互作用

 

　　(5)多糖—蛋白相互作用

 

　　(6)核酸—小分子化合物相互作用

 

　　按分析方式分：

 

　　(1)动力学分析Ka、Kd、KD

 

　　(2)平衡(稳态)分析平衡常数KD

 

　　(3)浓度测定

 

　　(4)热力学分析

 

　　(5)竞争结合

 

　　(6)终点分析

 

样本检测注意事项

 

　　用于ligand(标记分子)的样品要求：

 

　　1.蛋白活性要高，如果是自己表达的样品，请尽量新鲜制备；如果是购买的蛋白，尽量不要使用溶解后分装冻存已经很长时间的样品；

 

　　2.蛋白尽量纯化，纯度超过90%比较理想；

 

　　3.如果蛋白纯化困难，并且analyte分子量超过5kD，可以考虑用抗体capture，如果这样，用户需要提供抗体，不接受未经任何提纯处理的真核细胞裂解液；

 

　　4.纯化后的蛋白溶液不要含有Tris、咪唑等含有氨基或亚氨基的化合物成分；

 

　　5.提供样品分子量；

 

　　6.蛋白样品请提供大致的等电点；

 

　　7.蛋白浓度尽量不低于30 mM(即微mol/L)。

 

　　8.样品总量不少于10-15 nmol(摩尔数=质量/分子量)

 

　　9.如果样品是核酸或多糖，请标记上biotin。

 

　　用于analyte(流动相分子)的样品要求：

 

　　1.样品应尽量纯化，纯度超过90%比较理想；

 

　　2.提供样品分子量；

 

　　3.蛋白样品如有可能，请提供大致等电点；

 

　　4.如果样品是溶液，请提供准确的样品浓度；

 

　　5.如果样品是溶液，初始浓度可根据大致亲和力水平调整：如果亲和力可能较弱(KD>10-6 M)，浓度不应低于10mM，如果亲和力较强(KD<10-6 M)，浓度可以低至10 mM；

 

　　6.如果样品是粉末状态，请提供准确质量和分子量信息以及溶解方式等；

 

　　7.样品的总体积应当不少于10mL，最好能在50mL以上；

 

　　8.确保化合物在较低DMSO浓度的情况下具有良好的水溶解性。

 

　　缓冲液要求：

 

　　PBST缓冲液(10mM Na3PO4，150mM NaCl，0.01% Tween，pH=7.4)，如果实验有特殊要求，请提供缓冲液，缓冲液总量不少于2 L，要用0.2mm滤膜过滤。

 

　　请查阅与所要做的蛋白和小分子相关的SPR文献。

 

设备使用相关说明

 

　　蛋白质相互作用仪利用SPR(Surface Plasmon Resonance)技术，即表面等离子共振技术，可以在天然状态下反映蛋白质-蛋白质、蛋白质-核酸、新药分子-疾病靶蛋白等生物分子相互作用，如特异结合、解离、分子识别等动力学过程，为实时、动态获取生物分子互作信息，从而阐明生命现象的分子机理提供了有效的研究工具，有助于更加全面和深刻地理解生物分子的结构和功能。